2017年初以来，在国内主要鹅养殖省份如山东、安徽、广东、四川等地的鹅养殖场开始流行一种以临床症状为拉石灰样稀便、脱水、消瘦、瘫痪和死亡鹅剖检病理变化为肾肿大、斑驳、输尿管有白色尿酸盐沉积物，内脏、关节、肌肉等有白色尿酸盐附着、结晶的疾病，临床称为鹅“痛风病”，病原经本实验室确诊为鹅星状病毒。随着该病的流行，也许与病毒毒力增强有关，2018年2月以后临床自然感染发生鹅“痛风病”的病例中除了上述症状外，还多见肠道栓子，类似于小鹅瘟。肠道栓子的出现，导致临床将该病误诊为小鹅瘟的增多，发病鹅按小鹅瘟用小鹅瘟精制卵黄抗体进行治疗效果无效。

1材料

1.1临床病料 

于2018年4月17日采自河南省商丘市某临床自然感染发生鹅“痛风病”并有肠道栓塞死亡病理变化雏鹅的肝脏和肾脏。

1.2 雏鹅 

1日龄、健康四川白鹅，购自四川省隆昌市禽苗市场，饲养于重庆永健生物技术有限责任公司实验动物房。

1.3 病毒

    鹅星状病毒SD株第6代和10代，对鸭胚的半数致死量分别为10^-5.62 ELD₅₀/0.1 ml和10^-6.50 ELD₅₀/0.1 ml，由重庆永健生物技术有限责任公司和重庆三杰众鑫生物工程有限公司分离鉴定。

1.4试剂 

    生理盐水，由重庆永健生物技术有限责任公司研究所用氯化钠配制；PrimeScript™RT Master Mix(Perfect Real Time)、RNAiso Plus（Total RNA提取试剂）、MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0、反转录试剂盒、DNA Marker DL2000、快速琼脂糖凝胶回收试剂盒等均购自宝生物工程（大连）有限公司（TaKaRa）。

1.5仪器设备

    PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、组织捣碎机，北京六一仪器厂生产；针孔滤器，MILLEX GP生产；高速冷冻离心机，盐城凯特试验仪器有限公司生产；切片机，KEDEE公司生产；生化培养箱，上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产；超净工作台，上海苏净实业有限公司生产。

2方法

2.1人工感染试验

30只雏鹅，随机分为3组，每组10只。第1组为健康对照组，肌肉注射生理盐水0.5 ml/只；第2-3组分别肌肉注射100倍稀释的鹅星状病毒SD株第6代和10代各0.5 ml/只，攻毒后观察10日，统计各组鹅的死亡数。观察期内死亡鹅剖检观察病理变化。

2.3临床病料实验室诊断

2.3.1 临床病料采集处鹅场的发病情况

该批雏鹅2300只，在1日龄时注射过小鹅瘟精制卵黄抗体，在4日龄时发病，临床症状为精神沉郁、拉白色稀便，当地兽医根据死亡鹅肠道有类似于小鹅瘟的栓子症状，按小鹅瘟进行治疗，立即给全群鹅肌注小鹅瘟精制卵黄抗体1.5 ml/只，同时抗体内配头孢噻呋钠，剂量为0.2 g/100只鹅，该治疗方案观察3天无效。该养殖场负责人于发病后4日给重庆永健生物技术有限责任公司技术服务部打电话咨询该病，公司派河南片区业务经理魏永东于次日去该养殖场了解情况，发病后5日雏鹅死亡率23.7%，魏经理现场剖检了12只刚死亡的鹅、拍照，同时收集死亡鹅的肝脏和肾脏，快递回公司研究所进行实验室诊断。

2.3.2引物

小鹅瘟和鹅星状病毒引物见表1。引物由上海生工生物工程有限公司合成。

表1 引物

2.3.3 RT-PCR

从病料提取RNA，反转录合成cDNA，用小鹅瘟和鹅星状病毒引物分别进行PCR，同时设小鹅瘟和鹅星状病毒对照，PCR反应体系和反应条件见表2和表3。产物经1%琼脂糖凝胶电泳、观察。

表2 PCR反应体系

表3 PCR反应条件

2.3.4 基因测序分析

临床病料如扩增出目的条带，切下目的条带，用胶回收试剂盒回收、纯化DNA,送上海生工生物工程有限公司测序，比对同源性。

3结果

3.1人工感染试验

第1组鹅全部健活，剖检观察肾脏等内脏器官无异常。第2组鹅死亡3只，剖检其中有2只见肾脏肿大、斑驳，输尿管有尿酸盐沉积，第3只除前述症状外，还有心脏和肝脏附着白色尿酸盐及胆囊内有尿酸盐沉积。第3组鹅死亡4只，剖检其中2只见肾脏肿大、斑驳，输尿管有尿酸盐沉积；第3-4只除有前述症状外，还有肠道栓子，其中的第3只心脏附着白色尿酸盐和腿关节有尿酸盐沉积。

3.3实验室诊断

3.3.1临床病料采集处鹅场的发病情况

根据魏永东经理现场拍摄的照片，发现死亡鹅不但有类似于小鹅瘟的栓子，还有鹅星状病毒感染导致的肾脏肿大、输尿管有尿酸盐沉积症状，结合3.1中鹅星状病毒人工感染雏鹅后的症状和该批鹅用小鹅瘟精制卵黄抗体治疗无效的情况，初步判定该批鹅是感染了鹅星状病毒。

3.3.2 RT-PCR

在小鹅瘟病毒和鹅星状病毒阳性对照成立条件下，病料用鹅星状病毒引物扩增出了约434 bp目的条带，与预期大小相符；病料用小鹅瘟病毒引物未扩增出目的条带。结果说明该养殖场的鹅感染了鹅星状病毒。

3.3.3 基因测序分析  

    由于是PCR产物直接测序，去掉首尾峰杂乱部分，实得测序片段为404 bp，基因片段如下：

GTACGTTGCCCAAGCCTCTCTTCTGGCGGATACGACAGATGCGTTACTTTTTCCTGTCCAACCATCATAAGACACCACAGCTTAAGAAACTCTATGATTGGTATGTCAAAAACTTAGTTGAAAAAATTATATTATTACCAACTGGGGAGGTTTGTACAGTTAAGAAGGGAAATCCAAGTGGCCAATATTCAACAACAGTGGACAACAATATGTGTAATGTCTGGCTCACCCATTTTGAGATAGCTTATCTTTATTGGAAACAGCATGGGTCATTGCCGACGCTCAGATTACTTAGGGATAATGTCACCATGATTTGCTATGGCGATGATAGGCTTGTGTCAATAAGGAAGGGTTTTATTAATTACGACACGAATGTCGTCATAGATATGTATAAAAATATTTTT

临床病料的基因片段与鹅星状病毒SD 株的同源性100%，与NCBI中的鹅星状病毒（Genbank登录号：KY807081.1）同源性98.5%（图9）。遗传进化分析结果（图10）显示，临床病料基因与鹅星状病毒SD 株平行，与鹅星状病毒（Genbank登录号：KY807081.1）遗传关系也较近。

4 讨论

截止目前，没有中文文献报道鹅“痛风病”是传染病，现有中文文献^[1-3]均报道鹅发生“痛风病”的原因为饲料蛋白含量高和钙磷比例失调导致的，但上述原因导致的鹅“痛风病”散发，不具有传染性和流行性，发病后采取降低饲料蛋白含量如添加青饲料，用抗生素预防继发感染和加通肾药物促进尿酸排出有效，可治愈。国内目前流行的鹅“痛风病”具有传染性，是由鹅星状病毒^[4，5]感染导致的，按前述中文文献报道的方法治疗无效，本实验中用鹅星状病毒SD株人工感染1日龄雏鹅能复制出与自然感染一致的病理变化，进一步证实了鹅“痛风病”是由鹅星状病毒感染导致的，是传染病。

文献^[6,7]报道能导致鹅出现肠道栓子的病原只有小鹅瘟病毒，基层兽医只要看到鹅有肠道栓子就按小鹅瘟治疗，一直效果很好。本研究团队从2016年初以来对国内流行的鹅“痛风病”进行了持续研究，至2018年1月以前，鹅“痛风病”的临床症状和病理变化均为拉稀或内脏痛风^[4，5]，但从2018年3月份开始，临床发生鹅“痛风病”还伴有类似于小鹅瘟的肠道栓塞症状，鉴于临床兽医对鹅星状病毒感染导致的症状认识不足，均按小鹅瘟进行治疗，造成了较大的经济损失。分析2014年-2018年鹅星状病毒的临床症状和病理变化发展趋势，鹅星状病毒感染后出现栓子症状也许与病毒的毒力增强有关，如国内第一个报道鹅星状病毒的是张大丙^[4] ，他2014年从湖南鹅发生拉稀症状的病例中检测到的鹅星状病毒；苏敬良^[5]2018年报道的，2017年鹅感染鹅星状病毒会有内脏痛风；本研究用不同毒力的鹅星状病毒SD株人工感染试验，随着毒力的增强，鹅除了有拉稀和内脏痛风外，还有肠道栓子；对从河南采集的病理变化为肾肿大、输尿管有尿酸盐沉积及肠道栓塞死亡鹅肝脏和肾脏进行实验室检测，结果为鹅星状病毒阳性、小鹅瘟病毒为阴性。上述结果证明了肠道栓子的出现鹅星状病毒毒力增强有关。

本研究第一个报道鹅感染鹅星状病毒后除了有拉稀的临床症状和痛风的病理变化外，还有肠道出现栓子的病理变化，为临床诊断小鹅瘟和鹅星状病毒提供了依据。

参考文献：

[1]马倩.1例雏鹅痛风病的诊治体会[J].兽医临诊，2016（330）,68-69.

[2]陈英辉.鹅痛风的发生原因与诊治[J].养禽,2017(04),112.

[3]刘冬.鹅痛风病的病因、临床症状与防治措施[J].现代畜牧科技，2017（04）,105.

[4]Yuxuan Zhang,Fumin Wang,Ning Liu et al. Complete genome sequence of a novel avastrovirus in goose. Arch Virol,2017,162:2135-2139.

[5]Qingshui Zhang, Yanxin Cao, Jun Wang et al. Isolation and characterization of an astrovirus causing fatal visceral gout in domestic goslings. Emerging Microbes & Infections (2018) 7:71, DOI 10.1038/s41426-018-0074-5.

[6]方定一,王永坤,郑玉美 等.小鹅瘟病原体及其特异防治的研究.中国农业科学,1981,14(4):1-9.

[7]耿文玉,陈晓东,赵秋玲 等.小鹅瘟的诊断与防治.黑龙江畜牧兽医,2000(11):24.

致谢：本研究中的临床病料由重庆永健生物技术有限责任公司河南片区经理魏永东提供，在此表示感谢。